Материалы конгрессов и конференций

VII РОССИЙСКАЯ ОНКОЛОГИЧЕСКАЯ КОНФЕРЕНЦИЯ

ВАРИАНТЫ ИММУНОФЕНОТИПА РАКА МОЛОЧНОЙ ЖЕЛЕЗЫ И ИХ КЛИНИЧЕСКОЕ ЗНАЧЕНИЕ ДЛЯ ПРОГНОЗА

В.П. Летягин, Н.Н. Тупицын, Е.В. Артамонова
ФГБУ «НМИЦ онкологии им. Н.Н. Блохина» Минздрава России, Москва

Во всем мире с каждым годом констатируют увеличение числа регистрируемых случаев рака молочной железы. При таком развитии в ХХI веке возникает высокая вероятность появления на планете более 1000.000 заболевших раком этой локализации. Так, в США в 1998 г. зарегистрировано 180.300 новых случаев рака молочной железы и 43.900 летальных исходов этого заболевания. В 2000 г. в России заболели 44.800 женщин. Средний возраст заболевших составил 55-74 года. За 2000 г. в России от рака молочной железы умерли 21.994 человек, причем показатели смертности и заболеваемости имеют тенденцию к росту (Давыдов М.И., Аксель Е.М., 2002).

В структуре научных изысканий опухолей молочной железы большое место занимают иммунологические исследования. Они ведутся по двум направлениям: изучение иммунофенотипа опухоли и изучение противоопухолевого иммунитета.

Исследования в этом направлении стали широко проводиться с внедрением в клиническую практику моноклональных антител (МКА) как к лейкоцитарным молекулам, так и к антигенам и рецепторам, специфичным для эпителиальных клеток (2, 3, 4, 5).

Иммунофенотип рака молочной железы был изучен у 239 больных с помощью панели МКА. Мы оценили экспрессию злокачественными клетками эпителиальных антигенов (Egp34, MUC-1, РЭА), молекул главного комплекса гистосовместимости I и II классов и антигенов кластеров лейкоцитарной дифференцировки (сюда вошли рецепторы трансферрина CD71 и молекулы адгезии CD29), которые играют определенную роль в регуляции процессов опухолевого роста.

Иммуногистохимическое исследование первичных опухолей проведено на криостатных срезах 239 опухолей молочных желез, полученных в ходе операции (230 больных) и с помощью трепанбиопсий (9 больных).

Основную часть (171 чел. - 71,5%) составили больные с инфильтрирующим протоковым раком, инфильтрирующий дольковый рак отмечен у 22 (9,2%) пациенток, смешанный – у 21 (8,8%) женщины, а остальные больные (25 – 10,5%) имели редкие формы. Консервативное лечение (химиолучевое) проведено 9 больным с IV стадией. Хирургическое лечение получили 116 (50,4%) пациенток. Комплексная терапия проведена 36 (15,7%), а комбинированная – 78 (33,9%) больным.

Результаты нашего исследования позволили выделить два типа гетерогенности экспрессии маркеров: в группе «рак молочной железы» и в пределах одного случая.

Общеэпителиальный антиген Egp34 отличается мономорфностью экспрессии при раке молочной железы. Этот маркер выявляется в 100% случаев рака молочной железы и отличается исключительно высокой частотой мономорфных реакций (98,7%), что позволяет успешно локализовать все опухолевые зоны в препарате для их дальнейшего детального изучения с помощью других МКА.

С другой стороны, Egp34 отсутствует на клетках неэпителиального происхождения, что позволяет использовать МКА НЕА-125 для дифференциальной диагностики недифференцированных опухолей эпителиального и неэпителиального происхождения, а также для иммуноморфологического выявления микрометастазов рака молочной железы в регионарные лимфоузлы и костный мозг. Применение МКА НЕА-125 к Egp34 позволило увеличить частоту выявления метастазов на 6,8% по сравнению с морфологическим исследованием.

Вторым изученным нами маркером был муциноподобный антиген MUC-1. Он также часто (в 94,0% случаев) выявлялся при раке молочной железы, однако гораздо реже, чем Egp34, отличался мономорфным типом реакции (МКА ICO-25 реагировал с большинством опухолевых клеток лишь в 56,3% наблюдений).

При оценке взаимосвязи экспрессии различных антигенов клетками рака молочной железы мы обнаружили значимую положительную корреляцию между муциноподобным антигеном MUC-1 и РЭА. Все 100% опухолей, мономорфно экспрессирующих РЭА, также мономорфно экспрессировали MUC-1. Вероятно, появление РЭА-положительных и MUC-1-положительных фенотипов взаимосвязано между собой, является отражением злокачественной трансформации и связанных с ней процессов анаплазии и дедифференцировки и может оказаться фактором неблагоприятного прогноза заболевания.

Применение МКА ICO-25 для исследования регионарных лимфоузлов у больных раком молочной железы с N0 позволило увеличить частоту выявления метастазов на 8,3% по сравнению с гистологическим исследованием, поэтому иммуногистохимическое исследование регионарных лимфоузлов с МКА ICO-25 целесообразно проводить в дополнение к стандартному гистологическому исследованию у больных раком молочной железы группы N0, что совпадает с мнением других авторов (6, 7, 8, 9).

Показатель общей 5-летней выживаемости составил при отсутствии MUC-1 на опухолевых клетках 75,0±21,6%; при мозаичной экспрессии – 74,8±5,9% и в группе мономорфной экспрессией – 67,0±5,4%.

Третьим эпителиальным маркером, оцененным нами при раке молочной железы, был раково-эмбриональный антиген (РЭА). Он характеризуется гетерогенностью экспрессии, как в нозологической группе, так и в пределах одного случая и наиболее редко, по сравнению с Egp34 и MUC-1, выявляется на клетках первичной опухоли (29,5% случаев).

При исследовании местных иммунных реакций в группах с РЭА-мономорфным, мозаичным и отрицательным фенотипом выяснилось, что экспрессия РЭА приводила к достоверному снижению инфильтрации опухоли CD7+ T-лимфоцитами, что отражалось и на снижении общего уровня инфильтрации опухоли лимфоцитами, оцененного по общелейкоцитарному антигену CD45.

Наличие РЭА на клетках рака молочной железы вызывало достоверное увеличение частоты метастатического поражения регионарных лимфоузлов независимо от количества антигенположительных клеток (мономорфная и мозаичная реакция) (10).

При отсутствии антигена общая 5-летняя выживаемость составила 83,2±4,5%, при мозаичной реакции – 79,7±10,9% и мономорфной – 52,4±14,4%.

В целом частота обнаружения метастазов в регионарные лимфоузлы методом иммуногистохимии по совокупному показателю, достигнутому на основании применения трех МКА к эпителиальным антигенам (НЕА-125, НЕА-19 и ICO-25), была на 13,5% выше, чем при гистологическом исследовании.

Комплекс МКА (НЕА-125, НЕА-19 и ICO-25) оказался пригодным и для обнаружения раковых клеток в стернальном пунктате больных раком молочной железы.

Исследование антигенов главного комплекса гистосовместимости показало, что экспрессия HLA-I класса определяется в 56,5% случаев рака молочной железы; в 32,3% наблюдений отмечена мономорфная реакция; в 24,0% - мозаичная, а 43,8% случаев были полностью антиген-негативными.

Антигенный профиль опухолевых клеток существенно отличается от нормальной ткани молочной железы. Фенотип нормальных эпителиальных клеток во всех случаях соответствует HLA-I+ HLA-DR-. При раке молочной железы подобный нормальный фенотип наблюдался лишь в 18,1% наблюдений, а чаще всего рак молочной железы характеризовался полным отсутствием антигенов главного комплекса гистосовместимости на опухолевых клетках (41,4%).

Экспрессия HLA-I также статистически значимо положительно коррелировала с выявлением на опухолевых клетках молекул адгезии (CD29). В норме на эпителии молочной железы молекулы VLA-? экспрессированы во всех случаях и, следовательно, их утрата может являться косвенным отражением нарушения механизмов адгезии и связанной с этим активизацией процессов инвазии и метастазирования.

При исследовании HLA-I показатели 5-летней общей выживаемости существенно не отличались и составили при HLA-I(-) – 73,3±5,9%, при HLA-I(±) – 78,4±7,4% и при HLA-I(+) – 73,5±7,0%.

Проведенное исследование HLA-II класса показало, что при отсутствии экспрессии 5-летняя общая выживаемость составила 77,8±4,2%, при мозаичной – 81,7±7,4% и мономорфной – 58,8±12,1%.

Изучение местных иммунных реакций в группах с HLA-I положительным, мозаичным и негативным фенотипами установлено, что экспрессия молекул I класса статистически значимо коррелирует с увеличением инфильтрации опухоли T-лимфоцитами (CD5+, CD7+), их субпопуляциями (CD4+, CD8+) и макрофагами (CD163+), что отражается на увеличении общего уровня лейкоцитарной инфильтрации, оцененного по CD45. Молекулы HLA-I не влияют на реакцию В-лимфоцитов (CD19+, CD37+) и плазматических клеток (CD38+).

При изучении местных иммунных реакций в группах с HLA-DR положительным, мозаичным и негативным фенотипами установлено, что экспрессия молекул II класса при раке молочной железы статистически значимо коррелирует с увеличением инфильтрации опухоли по большинству субпопуляций иммунокомпетентных клеток. Отмечена положительная связь с общим уровнем лейкоцитарной инфильтрации (CD45+), реакцией CD7+ T-лимфоцитов и их субпопуляций (CD4+, CD8+), макрофагов (CD163+), CD19+ и CD37+ В-лимфоцитов и CD38+ плазматических клеток.

Таким образом, в целом экспрессия антигенов главного комплекса гистосовместимости клетками рака молочной железы была ассоциирована с увеличением степени выраженности местных иммунных реакций (11).

Особый интерес клиницистов должны вызвать данные, полученные нами при изучении рецептора трансферрина (CD71). Маркер CD71 обнаруживался сравнительно часто: в 75,7% случаев рака молочной железы. Мономорфная экспрессия отмечена в 53,7% наблюдений, мозаичная – в 22,0%. Только 24,4% опухолей были полностью антиген-негативными. CD71 не был достоверно взаимосвязан с другими изученными маркерами.

При отсутствии этого маркера на раковых клетках регионарные лимфоузлы статистически значимо чаще оставались интактными (N0). Напротив, экспрессия CD71, независимо от количества антигенположительных клеток, приводила к достоверному увеличению частоты метастатического поражения регионарных лимфоузлов.

При отсутствии экспрессии общая 5-летняя выживаемость составила 96,4±3,5%, при мозаичном варианте – 63,9±10,4% и мономорфном – 69,1±7,5%.

Особое значение приобретает тот факт, что экспрессия CD71 оказывает неблагоприятное прогностическое влияние при ранних (I и IIa) стадиях рака молочной железы: прогрессирование в этой группе больных наблюдалось нами только при наличии на мембране злокачественных клеток рецепторов трансферрина. Очевидно, что эта категория пациенток нуждается в пристальном внимании клиницистов с позиции возможной целесообразности адъювантной терапии при ранних (N0) стадиях рака молочной железы.

Изучение взаимосвязи иммунной реакции со степенью распространенности рака молочной железы позволило вскрыть ряд очень важных закономерностей: с уменьшением общего уровня лейкоцитарной инфильтрации (CD45+), достоверно увеличивалась частота метастатического поражения регионарных лимфоузлов. Выявление отдаленных метастазов также достоверно отрицательно коррелировало с общим уровнем иммунного ответа (CD45+). Выраженный общий уровень местной иммунной реакции, оцененный по CD45, может служить самостоятельным фактором благоприятного прогноза у больных раком молочной железы.

Определение CD45 показало, что при слабой реакции общая 5-летняя выживаемость составила 61,4±9,3%; при умеренной – 72,7±7,0% и при выраженной – 77,9±5,3%.

Выраженная и умеренная реакция CD7+ Т-лимфоцитов отмечалась сравнительно редко: в 17,3% и в 32,7% случаев соответственно, а преобладал слабый тип реакции – 50,0% наблюдений.

Аналогичная тенденция отмечена и для субпопуляций Т-лимфоцитов. Выраженная, умеренная и слабая реакция CD4+ клеток отмечена в 14,2%; 29,1% и 56,7% случаев соответственно, CD8+ клеток – в 14,9%; 30,6% и 54,5% случаев соответственно.

Общая 5-летняя выживаемость при выраженной реакции на CD7 составила 74,1±8,0%; умеренной – 58,4±7,3% и слабой – 58,4±5,6%.

При исследовании CD8 выявлено, что при выраженной реакции общая 5-летняя выживаемость составила 88,9±7,4%, а при слабой – 57,2±7,3%;при исследовании CD4 показатель 5-летней общей выживаемости составил при выраженной реакции 88,2±7,8%, умеренной – 77,6±7,5% и слабой – 63,3±6,9%.

Изучение взаимосвязей между различными иммунокомпетентными клетками показало, что реакция Т-лимфоцитов и их субпопуляций (CD4+ и CD8+) высоко достоверно коррелировали между собой, а так же с реакцией В-лимфоцитов (CD19+ и CD37+), CD38+ лимфоцитов и плазматических клеток и макрофагов (CD163). Общий уровень иммунной реакции, оцененный по CD45, также высоко достоверно коррелировал с инфильтрацией опухоли Т-лимфоцитами и их субпопуляциями и зависел от последних.

Инфильтрация опухоли CD7+ Т-лимфоцитами и их субпопуляциями (CD 4+ и CD 8+) достоверно отрицательно коррелировала с величиной первичной опухоли.

С уменьшением реакции CD 4+ Т-хелперов/индукторов и CD8+ супрессоров/цитотоксических клеток достоверно увеличивалась частота обнаружения метастазов в регионарные лимфоузлы.

Частота выявления отдаленных метастазов также достоверно отрицательно коррелировала с инфильтрацией опухоли субпопуляцией CD8+ Т-лимфоцитов.

Стадия заболевания достоверно отрицательно коррелировала с реакцией CD8+ супрессоров/цитотоксических клеток.

Таким образом, исследование иммунофенотипа рака молочной железы является необходимым дополнением, позволяющим более четко определить прогноз заболевания и на этом основании выработать оптимальную тактику лечения и наблюдения за больной.

Список литературы:

1. Давыдов М.И., Аксель Е.М. // М. – 2002. – 281 стр.

2. Тупицын Н.Н. и др. // Экспер. онкология. – 1990. – т.12, №2. – с. 54-58.

3. Артамонова Е.В. // Вопросы онкологии. – 1994. – т.40, №7-12. – с. 314-318.

4. Доросевич А.Е. и др. // Архив патологии. – 1994. – т.55, №3. – с.51-55.

5. Барышников А.Ю., Топевицкий А.Г. // Моноклональные антитела в лаборатории и клинике. // М. – 1997. – с.99-105.

6. Cote R.J. et al. // Lancet. – 1999. – v.354, №9182. – p. 896-900.

7. Masser et al. // Hum.Pathol. – 1993. – v.24, №9. – p. 950-987.

8. Rampaul R.S. // Breast Cancer Res. – 2001. – v.3, №2. – p. 113-116.

9. Nayak S.K. et al. // In Vitro Cell. Dev. Biol. Anim. – 2000. – v. 36, №3. – p. 188-193.

10. Mori M. et al. // J. Clin. Oncol. – 1998. – v.16, №1. – p. 128-132.

11. Takahashi et al. // Br. J. Cancer. – 1999. – v.81, №2. – p. 342-349.